Northern blot

 概述

    Northern blot印迹杂交一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern?blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者病理环境下特定基因表达情况。，RNA混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离，随后凝胶上的RNA分子被转移到膜上。膜一般都带有正电荷，核酸分子由于带负电荷可以与膜很好的结合。RNA分子被转移到膜上后须经过烘烤或者紫外交联的方法加以固定。再与标记的探针进行杂交反应，通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量 或定性。杂交过后，可采用X胶片显色的方法来检测信号。Norther blot中的探针序列需要和检测目的基因序列互补配对，探针可以是DNA、RNA或者其它的寡聚核苷酸，体外合成的RNA探针可以采用更高的退火温度来减少背景中的噪音。

技术路线

1、探针制备

2、琼脂糖凝胶电泳分离待测RNA样品?

3、凝胶预处理

4、转膜?

5、紫外交联

6、预杂交

7、杂交

8、洗膜

10、放射性自显影检测

客户提供：

1、冻存组织、细胞样本，干冰运输，避免反复冻融

2、冻存RNA样本，RNA量尽量在50μg以上。

3、目的基因的序列和探针序列

研拓生物提供：

1、RNA样品检测报告；

2、Northern blot实验结报告（实验步骤；主要仪器及厂家；主要试剂及厂家批号；实验结果）

3、实验过程图片

4、原始实验结果及数据