GST-Pull down实验

概述

    蛋白-蛋白相互作用是蛋白质结构与功能研究中最重要的方面之一。GST pull-down原理是将靶蛋白与GST融合表达，并将蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结合物后通过电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白。"诱饵蛋白"和"捕获蛋白"均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。

技术路线

1、原核融合蛋白A（GST-A融合蛋白）的获得； 

2、真核融合蛋白B（cMyc-B融合蛋白）的获得； 

3、谷胱甘肽-琼脂糖树脂的处理； 

4、谷胱甘肽-琼脂糖树脂结合GST融合蛋白； 

5、预清除细胞裂解液； 

6、探测细胞裂解液。

客户提供：

1、兴趣基因的质粒或序列相关信息

2、特异性一抗（或由博奥科代购）

研拓生物提供：

1、构建得到的兴趣基因表达质粒

2、westem blot检测结果

3、实验报告(实验步骤、主要仪器及厂家、主要试剂及厂家批号、实验结果）

4、实验记录本

5、原始图片及数据