凝胶电泳迁移率实验（EMSA）

概述

   EMSA是检测蛋白与DNA形成复合体并直接相互作用的技术方法，可用于定性和定量分析，能够更准确的判断蛋白与DNA的特异性结合序列，因此蛋白-DNA复合体的识别在研究基因的表达调控中具有重要作用。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素或生物素标记的DNA或RNA探针共孵育，在非变性聚丙酰胺烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异)，和其它非相关的片段(非特异)，来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

实验步骤

1、探针设计及合成及标记；

2、EMSA电泳凝胶配置；

3、EMSA结合反应；

4、紫外交联；

5、EMSA反应物电泳分析；

客户提供：

1、 探针序列和标记物选择

2、 实验方案或者细胞核核蛋白提取物

研拓生物提供：

1、合成标记的探针

2、实验报告(主要仪器及厂家、主要试剂及厂家批号、实验步骤、实验结果）

3、原始图片及数据