原代细胞提取与培养

 

概述

   原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。细胞原代培养的传统目标是提供足够数量的可存活细胞以确保所得出的细胞能反映出在其来源组织中的分布情况。不同组织的细胞，由于内部构造不同，生理功能不同，所处环境条件不同，因而形态多种多样，如呈圆形、椭圆形、正方形、柱形、扁平形、梭形、星形、和多边形等。

培养方法：

1、组织块培养法

  （1）用眼科剪将组织剪成小块（1mm³），并加入少许培养基使组织湿润。

  （2）将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2-0.5cm，一般在25ml培养瓶接种20-30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后瓶内加入适量培养基盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在37℃孵箱内。

  （3）培养2-4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，严禁摇动和来回震荡，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一层血清，开始培养时培养基不宜多，以保证组织块湿润即可，培养24小时后补液，培养初期，尽量不去挪动，以利贴壁和培养，培养3-5天时可换液。

2、消化培养法

   该方法是通过胶原酶或胰酶将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

3、悬浮细胞培养法

   对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

 

客户提供：

1. 详细说明进行原代培养的组织，并确定组织是由客户提供还是本公司提供；

2. 尽可能提供该原代细胞的培养条件，或由本公司摸索培养条件。

 

交付结果：

1.详细实验报告（包括实验步骤和主要仪器及试剂说明）；

2.冻存或处于对数生长期的细胞株一瓶（说明书细胞：培养条件，图片）。