技术服务
磷酸化
蛋白磷酸化发生于Ser残基,一般与基因活化相关,直接影响目标的活性和功能。这种关键的翻译后修饰调控了广泛的细胞活性,包括细胞周期、分化、代谢和神经元通讯。此外,异常的磷酸化事件与许多疾病状态相关。本公司提供磷酸化检测方法主要分为以下5种:
激酶活性分析:
生物学样品中的激酶活性通常是在体外测定的,在ATP的存在下将免疫沉淀的激酶与外源底物共同孵育。之后通过一些报告系统来评估特定激酶对底物的磷酸化,包括显色、放射性或荧光检测。
Western blot:
Western blot是评估蛋白磷酸化状态的最常用方法,许多磷酸化特异抗体十分灵敏,可轻松检测常规样品(如10-30µg细胞提取物)中的磷酸化蛋白。由于测得的磷酸化蛋白水平可能随处理或凝胶上样误差而变化,研究人员常常利用一个抗体来检测同源蛋白的总水平(而不考虑磷酸化状态),以确定磷酸化组分相对于总组分的比例,并充当上样内对照。
酶联免疫吸附分析(ELISA):
已逐渐成为测定蛋白磷酸化的一种有力方法。磷酸化特异的ELISA技术具有一些优点。1. 利用经过校准的标准品,定量结果更准确。2.特异性更高。3.灵敏度更高,可以检测低丰度的蛋白。4. 高通量检测。
细胞内流式细胞术和ICC/IHC:
流式细胞仪利用激光来激发用于抗体检测的荧光染料。通过细胞表面标志的分型可检测异质群体中特定细胞类型的蛋白,通过这种方法可分析稀有的细胞群体,而不用担心细胞损失或细胞分选过程中可能发生的蛋白表达变化。
ICC通常指的是利用显微镜对培养细胞中的蛋白进行检测,通常是确定细胞内定位的首选方法;而IHC指的是对完整组织切片中的蛋白进行检测。
质谱:
复杂的生物样品(如细胞裂解液)中蛋白质磷酸化的全面评估(磷酸化蛋白质组学),包括磷酸化蛋白和磷酸化肽段的鉴定,以及磷酸化残基的测序。
客户提供:
1、蛋百样品或者冻存细胞、组织
2、一抗信息
研拓生物提供:
1、实验过程影像资料
2、实验报告(实验步骤、实验仪器、实验试剂等)
3、原始图片及资料

